Услуги
Получение моноклональных антител
Научно-производственное объединение "БиоТест Системы" предлагает Вам помощь в получении гибридом, продуцирующих моноклональные антитела к требуемым антигенам.

Получение гибридом проводится в течение 4-8 месяцев и включает следующие стадии:

1. Предварительная оценка работы.

На начальном этапе проводится оценка антигена Заказчика, его чистоты, количества, необходимости конъюгирования с носителем, методов скрининга гибридомных клонов. В случае пептидных антигенов, мы можем сами синтезировать требуемый пептид, очистить его и конъюгировать с носителем (см. подраздел СИНТЕЗ ПЕПТИДОВ).

С учетом требований Заказчика, на 1-м этапе работы определяется объем работы и предлагается оптимальная схема получения гибридом.

2. Иммунизация.

Проводится иммунизация 3-5 мышей BALB/c. В зависимости от типа антигена на иммунизацию одной мыши требуется 100-300 мкг антигена. Оптимальная схема иммунизации выбирается с учетом типа антигена. После 2-й иммунизации оценивается титр антител против антигена. В случае слабого иммунного ответа проводятся дополнительные иммунизации.

3. Слияние и скрининг.

Этот этап включает в себя подготовку миеломных клеток, бустерную иммунизацию мыши, слияние миеломных клеток со спленоцитами, селекцию гибридов на НАТ-среде, скрининг гибридомных клонов на синтез антител требуемой специфичности. На данном этапе, по желанию Заказчика, может быть проведено дополнительное исследование антител с помощью иммуноблоттинга или других методов. 3-6 положительнах клонов отбираются и замораживаются для дальнейшего клонирования. По желанию Заказчика, количество замороженных положительных смешанных клонов может быть увеличено.

4. Клонирование.

Отобранные положительные гибридомные клоны дважды клонируются методом редкого посева и по 10 мл культуральной жидкости от каждого клона передается Заказчику на тестирование.

5. Заморозка клеток.

Положительные моноклоны замораживаются. 3 ампулы каждого клона и по 20 мл культуральной жидкости от каждого клона передается Заказчику. По желанию Заказчика, могут быть приготовлены 2 дополнительные ампулы для хранения в клеточном банке НПО "БиоТест Системы".

Мы можем наработать асцитные жидкости в требуемых Вам количествах (см. подраздел НАРАБОТКА АСЦИТНЫХ ЖИДКОСТЕЙ). Предоставляются также услуги по очистке антител (ДЭАЭ-Сефароза, белок-А Сефароза, белок-G Сефароза, иммунно-аффинная очистка антител), конъюгированию антител с ферментами (пероксидаза), флуорохромами (FITC), биотином и агарозой (см. подраздел ОЧИСТКА И КОНЪЮГИРОВАНИЕ АНТИТЕЛ).

Получение моноклональных антител
Научно-производственное объединение "БиоТест Системы" предлагает Вам помощь в получении гибридом, продуцирующих моноклональные антитела к требуемым антигенам.

Получение гибридом проводится в течение 4-8 месяцев и включает следующие стадии:

1. Предварительная оценка работы.

На начальном этапе проводится оценка антигена Заказчика, его чистоты, количества, необходимости конъюгирования с носителем, методов скрининга гибридомных клонов. В случае пептидных антигенов, мы можем сами синтезировать требуемый пептид, очистить его и конъюгировать с носителем (см. подраздел СИНТЕЗ ПЕПТИДОВ).

С учетом требований Заказчика, на 1-м этапе работы определяется объем работы и предлагается оптимальная схема получения гибридом.

2. Иммунизация.

Проводится иммунизация 3-5 мышей BALB/c. В зависимости от типа антигена на иммунизацию одной мыши требуется 100-300 мкг антигена. Оптимальная схема иммунизации выбирается с учетом типа антигена. После 2-й иммунизации оценивается титр антител против антигена. В случае слабого иммунного ответа проводятся дополнительные иммунизации.

3. Слияние и скрининг.

Этот этап включает в себя подготовку миеломных клеток, бустерную иммунизацию мыши, слияние миеломных клеток со спленоцитами, селекцию гибридов на НАТ-среде, скрининг гибридомных клонов на синтез антител требуемой специфичности. На данном этапе, по желанию Заказчика, может быть проведено дополнительное исследование антител с помощью иммуноблоттинга или других методов. 3-6 положительнах клонов отбираются и замораживаются для дальнейшего клонирования. По желанию Заказчика, количество замороженных положительных смешанных клонов может быть увеличено.

4. Клонирование.

Отобранные положительные гибридомные клоны дважды клонируются методом редкого посева и по 10 мл культуральной жидкости от каждого клона передается Заказчику на тестирование.

5. Заморозка клеток.

Положительные моноклоны замораживаются. 3 ампулы каждого клона и по 20 мл культуральной жидкости от каждого клона передается Заказчику. По желанию Заказчика, могут быть приготовлены 2 дополнительные ампулы для хранения в клеточном банке НПО "БиоТест Системы".

Мы можем наработать асцитные жидкости в требуемых Вам количествах (см. подраздел НАРАБОТКА АСЦИТНЫХ ЖИДКОСТЕЙ). Предоставляются также услуги по очистке антител (ДЭАЭ-Сефароза, белок-А Сефароза, белок-G Сефароза, иммунно-аффинная очистка антител), конъюгированию антител с ферментами (пероксидаза), флуорохромами (FITC), биотином и агарозой (см. подраздел ОЧИСТКА И КОНЪЮГИРОВАНИЕ АНТИТЕЛ).

Получение поликлональных антител
Научно-производственное объединение "БиоТест Системы" предлагает Вам помощь в получении поликлональных антител к требуемым антигенам.
Возможно получение антител в кроликах, мышах. Необходимое количество животных определяется требованиями заказчика.

Получение поликлональных антител включает в себя иммунизации, отбор крови, тестирование сыворотки крови. На начальном этапе проводится оценка антигена Заказчика, его чистоты, количества, необходимости конъюгирования с носителем. В случае пептидных антигенов, мы можем сами синтезировать требуемый пептид (10-15 мг), очистить его и конъюгировать с носителем. С учетом требований Заказчика, определяется объем работы и предлагается оптимальная схема получения гибридом. Возможно получение антител по схеме, предложенной Заказчиком.

Обычная схема получения анти-пептидных антител включает 63-дневный протокол. Предоставляются также услуги по очистке антител на ДЭАЭ-Сефарозе, белок-А Сефарозе, а также по конъюгированию антител с ферментами (пероксидаза), флуорохромами (FITC), биотином и агарозой

При необходимости, возможно проведение дополнительных исследований полученных антител (иммуноблоттинг и др. методы).


Наработка асцитных жидкостей
Научно-производственное объединение "БиоТест Системы" предлагает Вам помощь в наработке моноклональных антител в форме асцитной жидкости в мышах BALB/c.

Необходимое количество животных определяется требованиями заказчика. Наработка асцитов включает в себя праймирование животных пристаном, размножение гибридомных клонов Заказчика в культуре клеток, инокуляция гибридом в мышей, сбор асцитной жидкости, определение титров специфических антител в полученных асцитах.

Предоставляются также услуги по очистке моноклональных антител антител на ДЭАЭ-Сефарозе, белок-А Сефарозе, а также по конъюгированию антител с ферментами (пероксидаза), флуорохромами (FITC), биотином и агарозой.
Очистка и коньюгирование антител
Антитела очищаются с помощью хроматографии на ДЭАЭ-Сефарозе, белок-А/G Сефарозе, а также с помощью иммуно-аффинной хроматографии. В очищенных антителах определяются титры специфических антител.

Предоставляются услуги по конъюгированию антител с ферментами (пероксидаза), флуорохромами (FITC), биотином и агарозой.
Синтез пептидов
Научно-производственное объединение "БиоТест Системы" предлагает синтез пептидов высокой степени чистоты по вашему заказу. Количество получаемого пептида варьирует от степени его чистоты и от размера пептида. Возможно получение киллограмовых количеств пептидов. Синтез осуществляется с использованием BOC- и FMOC-твердофазного синтеза, синтеза пептидов в растворе, сборки пептидов из фрагментов. По заказу синтезируются разветвленные пептиды.

Предлагаемые степени очистки пептидов - 70%, 80%, 90%, 95%, 98%. Очистка пептидов проводится методом препаративной HPLC. Контроль чистоты производится методом HPLC, аминокислотного анализа и масс-спектрометрии.

По желанию заказчика пептиды могут быть модифицированы. Предлагаются следующие модификации:
  • Ацетилирование
  • Бензилоксикарбонилирование
  • Биотинилирование
  • Дансилирование
  • Динитробензоилирование
  • Формилирование
  • Фосфорилирование (серин)
  • Фосфорилирование (треонин)
  • Фосфорилирование (тирозин)
  • Сукцинилирование
  • Сульфирование

Пептиды могут быть модифицированы флуоресцентными красителями:
  • Аминокумарин
  • Bodipy
  • FITC
  • Лиссамин
  • NBD
  • Тетраметилродамин

Пептиды могут быть конъюгированы с бычьим сывороточным альбумином (BSA) и гемоцианином (KLH).


Синтез олигонуклеотидов
Научно-производственное объединение "БиоТест Системы" предлагает синтез олигонуклеотидов высочайшего качества по вашему заказу.

Поставляется 4 масштаба синтеза олигонуклеотидов - 0,05 µmol, 0.2 µmol и 1,0 µmol, препаративные колитчества. Синтезируются олигонуклеотиды вплоть до 100 оснований. Выход на каждом шаге - 99%. Все олигонуклеотиды деблокированы, обессолены, количественно охарактеризованы и паспортизованы.

Синтезированные олигонуклеотиды очищаются с помощью HPLC.

Олигонуклеотиды могут быть модифицированы биотином и флуорохромами.

Контроль качества полученных олигонуклеотидов осуществляют с помощью UV-спектроскопии, тонкослойной хроматографии, HPLC, и 31P ЯМР.